Диагностические тест-системы для практикующего врача (серия “НикоКард”)

I. Тест-система “НикоКард — СРБ”. Одним из главных индикаторов воспаления у человека является С-реактивный белок (СРБ). СРБ — уникальный маркер острофазного ответа организма и степени его выраженности, он является самым чувствительным (увеличение




I. Тест-система “НикоКард — СРБ”. Одним из главных индикаторов воспаления у человека является С-реактивный белок (СРБ). СРБ — уникальный маркер острофазного ответа организма и степени его выраженности, он является самым чувствительным (увеличение в 20-100 раз, в отдельных случаях в 1000 раз) и самым быстрым (в первые 6-8 часов) показателем какого-либо повреждения [5].

Для адекватного количественного определения СРБ в сыворотке используются как сложнейшие радиоиммунологические, турбидиметрические, нефелометрические, иммуноферментные методы, так и “простая” радиальная иммунодиффузия [1, 2]. Для их реализации требуется длительная пробоподготовка и проведение сложных анализов, а также специальное оборудование и квалифицированный персонал. В то же время для практикующего врача (например, терапевта на приеме) из-за скорости развития многих заболеваний, при которых важно определение СРБ, возникает необходимость в быстром, легко интерпретируемом, безынструментальном и количественном тесте, пригодном для работы как с сывороткой/плазмой, так и с цельной кровью.

Этим требованиям, по нашему мнению, соответствует диагностическая система “НикоКард — СРБ” (“Никомед-Диагностик”, Норвегия) [9].

Тест “НикоКард — СРБ” работает по иммунометрическому/иммунофильтрационному принципу и состоит из: 1) кроверазводящей и лизирующей (для цельной крови) жидкости; 2) 4 или 8 карточек с шестью отверстиями, содержащими специфические моноклональные антитела против СРБ, иммобилизированные на порах мембраны, которая расположена на абсорбирующей бумаге, и 3) СРБ-специфических моноклональных антител, конъюгированных с ультрачастицами коллоидного золота.

Для забора крови из пальца используют стеклянные капилляры, предварительно обработанные антикоагулянтом (цитратом, гепарином или ЭДТА) и высушенные в сушильном шкафу. Полученную кровь разводят реагентом (25 мкл к 1000 мкл), тщательно перемешивают и выдерживают 40-60 сек для лизиса клеток. Затем 25 мкл разведенного образца крови вносят в одно из отверстий пористой мембраны, и после ее полной сорбции наносят по очереди каплю коньюгата и затем промывающего раствора для удаления непрореагировавших компонентов. Стойкое пурпурно-красное окрашивание диаметром 3,5 мм появляется сразу же, если проба содержала СРБ (5-10 мг/л). Концентрацию СРБ можно определить полуколичественно визуально. Быстрое и точное определение концентрации СРБ в мг/л осуществляется с помощью универсального портативного денситометра “НикоКард — Ридер”. Вся процедура анализа обычно длится 2-3 мин.

Патофизиологическая основа определения Д-димера — катаболизм фибринового сгустка

У здоровых индивидуумов уровень сывороточного СРБ обычно ниже 5-10 мг/л. Повышенные концентрации СРБ отмечаются через 6-12 часов после начала воспалительной реакции и достигают максимальных значений в пределах 48-72 часов. СРБ имеет относительно короткий период полужизни (1-2 дня) и обычно возвращается к норме через 5-10 дней после начала воспаления, поэтому быстрота и точность его определения имеют существенное значение для постановки и уточнения диагноза. Например, для дифференциальной диагностики между вирусной и бактериальной пневмониями, бронхитами и другими инфекционными состояниями. Кроме того, измерение уровня СРБ с помощью набора “НикоКард — СРБ” непосредственно на приеме у врача позволяет быстро решить вопрос о назначении (или неназначении) того или иного вида лечения: антибиотиков при бактериальной пневмонии или бактериальном обострении хронического бронхита и бронхиальной астмы, либо бронходилятаторов или антиастматического лечения при вирусных инфекциях дыхательного тракта. При этом следует учитывать, что показатели СРБ при бактериальных инфекциях увеличиваются быстрее и выглядят значительнее, чем при вирусных, и остаются на повышенном уровне больше недели в случае, если антибактериальная терапия не применялась [8].

Таким образом, диагностическая система “НикоКард — СРБ” позволяет быстро (в течение 2-3 мин) и точно (количественно с помощью “НикоКард — Ридер”) оценить наличие воспаления и степень его выраженности, отличить бактериальные инфекции от вирусных, выбрать адекватное лечение воспаления (антибиотики, стероиды, противовоспалительные средства) и контролировать сам процесс лечения. Тест-система показывает хорошую корреляцию с такими широко распространенными лабораторными методами исследования, как турбидиметрия, нефелометрия и иммуноферментный анализ [9], но значительно превосходит их по эргоемкости, т. е. простоте, экономичности и эффективности.

Лабораторная диагностика, приближенная к больному и понятная врачу — будущее практического здравоохранения. Тест “Никокард CRP” способен заменить легендарное СОЭ. Эта технология позволяет сэкономить средства и получить клинически значимые результаты

II. Тест-система “НикоКард — Д-димер”. Д-димер — один из конечных растворимых продуктов расщепления фибрина [4]. Повышенные уровни Д-димера в плазме свидетельствуют о чрезмерных количествах образовавшегося в сосудистой системе фибрина. При возникновении фибринового сгустка активизируются также фибринолитические процессы, которые начинаются с превращения плазминогена в плазмин в присутствии тканевого активатора плазминогена (тАП) и ионов кальция (см. рис.). Плазмин расщепляет полимеризированный фибрин, при этом соседние Д-домены ковалентно перекрестно сшиваются с образованием Д-димера, имеющего специфичные неоантигенные детерминанты [7].

Повышающиеся концентрации в плазме Д-димера указывают на продолжающийся фибринолитический процесс и являются ключевым показателем тромботического состояния при тромбозе глубоких вен, легочной тромбоэмболии, артериальной тромбоэмболии и диссеминированном внутрисосудистом свертывании. Определять Д-димер следует также при ранней диагностике фибринолитических процессов (претромботический риск), в мониторинге при тромболитической терапии, при беременности (послеродовой период), злокачественных новообразованиях и хирургических вмешательствах.

Тест-система “НикоКард — Д-димер” аналогична системе “НикоКард — СРБ” и построена на том же иммунометрическом и иммунофильтрационном принципе с использованием моноклональных антител, конъюгированных с золотом в качестве индикатора. Антитела не дают перекрестных реакций с фибриногеном и другими продуктами деградации фибрина. Ход определения Д-димера в техническом плане принципиально не отличается от тестов по системе “НикоКард — СРБ”. Необходимо всего 50 мкл цитратной плазмы, свободной от тромбоцитов, которая вносится в одно из отверстий пористой мембраны с моноклональными антителами против Д-димера. Пурпурно-розовое окрашивание полуколичественно оценивается визуально, а количественно регистрируется портативным денситометром “НикоКард — Ридер” в диапазоне 0,25 — 10 мг/л. Время определения 2-3 мин. Нормальные значения ниже 0,5 мг/л. Очевидно, что тест-система “НикоКард — Д-димер” объединяет в себе скорость и простоту латексных методов определения Д-димера с аналитическим качеством и чувствительностью иммуноферментных методов [4].

III. Тест-система “НикоКард — HbA1C”. Количество гликозилированного гемоглобина (HbA1C) в крови — важный показатель долговременного контроля за течением диабета и эффективностью его лечения.

Основные преимущества диагностических тест-систем серии “НикоКард” при подозрении на воспаление, тромбоз или эмболию, диабет:

  • Продолжительность исследований 2-3 мин, что позволяет проводить их непосредственно на приеме у врача, у постели больного, на дому, а также в любое время суток независимо от центральной лаборатории
  • Возможность в связи с этим быстро подтверждать или изменять диагноз, назначать или отменять лечение
  • Незначительные объемы крови для исследований, получаемой из пальца (3,5 — 100 мкл), позволяют обследовать даже новорожденных и детей младшего возраста
  • Полуколичественный учет проводится визуально, точные количественные данные получают с помощью портативного денситометра “НикоКард — Ридер”

Известно, что белки, в том числе гемоглобин, при длительном выдерживании в растворе, содержащем глюкозу, необратимо присоединяют ее остатки за счет химических (неэнзиматических) процессов [2]. Чем выше концентрация глюкозы в растворе и чем продолжительнее инкубация, тем больший процент молекул гемоглобина гликозилируется. Поэтому HbA1C характеризует средний уровень концентрации глюкозы в крови за время полужизни молекулы гемоглобина (3-4 мес.). Лечение диабета проводится лекарствами, понижающими содержание глюкозы в крови лишь на ограниченный промежуток времени, и очень важно подобрать схему лечения со стойкой нормализацией гликемии. Исследование HbA1C оказывается ценным лабораторным показателем, характеризующим некоторый средний уровень глюкозы на протяжении длительного промежутка времени. Количество HbA1C выражается в молярных процентах (количество остатков моносахарида на 100 молекул гемоглобина).

Для определения HbA1C разработано много способов, включающих различные виды хроматографии, электрофорез и колориметрические методы [3]. Наиболее точные из них хроматографические, но они трудоемки и требуют специальной аппаратуры и реактивов.

Тест-система “НикоКард — HbA1C” лишена этих недостатков и позволяет быстро, точно и воспроизводимо измерять уровень HbA1C в крови в присутствии пациента. Метод основан на специфическом химическом связывании искуственно синтезированного зонда (борная кислота, коньюгированная с синим красителем) с HbA1C после лизиса эритроцитов и преципитации гемоглобина ZnCl2. Эти процессы идут одновременно в течение 2 мин при добавлении 3,5 мкл цельной крови к 200 мкл специального реагента при перемешивании. 25 мкл смеси наносят на пористый фильтр, как и в двух описанных выше тест-системах. Излишки реагентов удаляют каплей промывающего раствора. Преципитат анализируют с помощью денситометра “НикоКард — Ридер”, измеряя интенсивность синего (гликозилированный гемоглобин, 620 нм) и красного (общий гемоглобин, 460 нм) окрашивания соответственно. Отношение 620:460 нм пропорционально проценту HbA1C в образце и вычисляется автоматически. Нормальные значения в крови — 4,5-6% HbA1C. Тест-система работает в диапазоне 4-18% HbA1C, не интерферирует с другими компонентами сыворотки, показывает хорошую воспроизводимость и корреляцию с HPLC [6].

Литература

1. Калинин Н. Л., Корнев А. В., Рыбкин Ю. Б. и сотр. // Клин. лабор. диагн. 1996. № 2. С. 35-38.
2. Лабораторные методы исследования в клинике // Под ред. В. В. Меньшикова. М., 1987.
3. Энциклопедия клинических лабораторных тестов // Под ред. Н. У. Тица и В. В. Меньшикова. М., 1997.
4. Dale S., Gogstad G. O., Brosstad F. et al. // Thromb. and Haemostasis. 1994. Vol. 71, № 3. P. 270-274.
5. Fassbender R., Pargger H., Muller W., Zimmerli W. // Crit. Care Med. 1993. Vol. 41, № 5. P. 471-476.
6. Frantzen F., Lovli T., Faaren A. L. et al. // Axis Biochemicals AS, Oslo, Norway, R&D Section, Nycomed Pharma AS, Oslo, Norway, 1998.
7. Gogstad G. O., Dale S., Brosstad F. et al. // Clin. Chem. 1993. Vol. 39, № 10. P. 2070-2076.
8. Melbye H., Berdal B. H., Straume B. et al. // Scand. J. Infect. Dis. 1992. № 24. P. 647-655.
9. Urdal P., Borch S. M., Landaas S. et al. // Clin. Chem. 1992. Vol. 38, № 4. P. 580-584.


Еженедельный дайджест "Лечащего врача": главные новости медицины в одной рассылке

Подписывайтесь на нашу email рассылку и оставайтесь в курсе самых важных медицинских событий


поле обязательно для заполнения
поле обязательно для заполнения
поле обязательно для заполнения
поле обязательно для заполнения
Нажимая на кнопку Подписаться, вы даете согласие на обработку персональных данных

Актуальные проблемы

Специализации




Календарь событий:




Вход на сайт